Era un ornitologo, naturalista e pittore americano.

Noto per i suoi studi approfonditi che documentavano tutti i tipi di uccelli americani e per le sue dettagliate illustrazioni che descrivevano gli uccelli nei loro habitat naturali.

Il suo lavoro principale, un libro a colori, intitolato The Birds of America (1827-1839), è considerato uno dei migliori lavori di ornitologia mai completati.

Le sue opere illustrano gli uccelli in attività, contrariamente a quanto si usava fare sino ad allora. Per studiare e copiare le loro posizioni naturali, dopo averli uccisi li legava sospesi a dei fili e queste operazioni preparatorie gli richiedevano un sacco di tempo.

Audubon ha identificato 25 nuove specie di uccelli.